Ph.d.-afhandlingen udgår fra Øjenafdeling J, Århus Sygehus, Århus Universitetshospital, og dens overordnede mål var at søge efter hornhindens limbale stamcellemarkører hos voksne og at undersøge udviklingen af hornhindestamceller og den limbale stamcelleniche i det embryonale og føtale øje.
Hornhindens epitel bliver til stadighed fornyet fra mindre differentierede celler, der oprinder fra basale celler i limbus corneae, de limbale stamceller. Man har endnu ikke identificeret en specifik stamcellemarkør, og den mest præcise måde at identificere den limbale stamcelle på er ved hjælp af et panel af stamcellemarkører.
I det første manuskript forsøger vi at anskue den limbale stamcelle fra en ny proteomvinkel. Vores hypotese var, at proteiner, der kun er udtrykt i det limbale epitel og ikke i det centrale epitel, kunne være markører for den limbale stamcelle. Endvidere kunne forskelle i »proteinfingeraftrykket« mellem det centrale og det limbale epitel indikere forskelle i cellernes biologiske funktion. Vi fandt, at superoxiddismutase 2 (SOD2) og cytokeratin 15 (CK15) næsten udelukkende var udtrykt i de basale limbale celler, og foreslår, at disse proteiner markerer limbale stamceller og de allertidligst differentierede celler. CK15-resultaterne var konfirmative. CK'er er vigtige i cellulær proliferation, differentiering og migration, og nogle er stamcellemarkører. Da hud, hår og slimhinder til stadighed udskiftes og afstødes, findes CK'er overalt i vores miljø, hvilket ses i alle massespektrometri-identifikationer. Når man håndterer overfladevævs proteomik, rejses følgende spørgsmål: Stammer en CK-identifikation fra det undersøgte væv, eller er det en kontaminering?
I det andet manuskript foreslår vi en metode til at skelne mellem en reel identifikation fra det undersøgte væv og en kontaminant med udgangspunkt i massespektrometri-identifikationerne i det første manuskript.
I det tredje manuskript undersøger vi nylige såvel som ældre foreslåede limbale stamcellemarkører og differentieringsmarkørers udbredelse i det humane øje fra ovulationsuge 6 til 14. Vi var i særlig grad interesseret i proteinekspressionen under udviklingen af den ektodermalt deriverede korneale stamcelle, som bliver til den limbale stamcelle. Endvidere ønskede vi at karakterisere den mesenkymale korneale stamcelle, der er involveret i etableringen af den limbale niche. SOD2 og CK15 var til stede allerede på det tidspunkt, hvor linsen afløses fra ektoderm, og hornhindeepitelet defineres. Disse proteiner var især til stede i det limbale epitel under etableringen af den limbale niche i uge 14. PAX6-tilstedeværelse i mesenkymet, der danner den tidlige limbale niche, kan forklare, at ikke kun den ektodermale udvikling men også udviklingen af den stromale proliferationszone er vigtig i forståelsen af aniridi-keratopati og andre PAX6-relaterede okulopatier hos mennesket. Denne viden kan måske få indflydelse på den måde, disse kliniske tilstande behandles.